Секвенирование (Генная инженерия)

    Дисциплина: Разное
    Тип работы: Реферат
    Тема: Секвенирование (Генная инженерия)

    ОГЛАВЛЕНИЕ

    Введение …………………………………………………………………………………………3

    1. Определение нуклеотидной последовательности модифицированным методом Максама и Гилберта ……………………………………………………………………………………….4

    2. Секвенирование ДНК методом полимеразного копирования ( метод Сэнгера) …………8

    3. Филогенетический анализ геномов вирусов ………………………………………………15

    4. Компьютерный анализ генетических текстов ……………………………………………..18

    Заключение ……………………………………………………………………………………..22

    Список литературы …………………………………………………………………………….23

    ВВЕДЕНИЕ.

    Разработка методов клонирования и определения последовательнос­ти

    оснований

    (секвенирования) нуклеиновых кислот положила начало новому этапу

    развития

    молекулярной

    биологии.

    Знание

    первичной структуры

    участков генома, выполняющих определенные функции, дало возможность эффективно применить для их исследования целый арсенал новых методов генной инженерии. Эти методы

    (направленный

    мутагенез, рекомбинация

    vitro и др.) позволяют модифицировать участки нуклеотидных последовательностей и исследовать их функции на моле­кулярном

    уровне. С их помощью комбинируются участки генетического материала и создаются геномы с совершенно новыми функциями.

    Секвенирование нуклеиновых кислот в настоящее время

    стало

    ру­тинным

    методом молекулярной биологии. Несомненно, в ближайшем бу­дущем появятся еще более совершенные

    автоматические

    секвенаторы, что

    приведет к резкому увеличению числа расшифрованных последова­тельностей.

    Благодаря

    знанию генетического кода появилась возможность опре­делять участки нуклеотидных последовательностей, кодирующих потен­циальные белки. Этот источник и сегодня дает

    нам ос­новную информацию о функциональном строении нуклеотидной

    последо­вательности.

    1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

    МОДИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ

    МАКСАМА И ГИЛБЕРТА.

    Быстрый прогресс, наблюдавшийся в последние годы в различных областях молекулярной биологии, во многом обусловлен появлением эффективного ме­тода определения первичной структуры ДНК.

    Этот метод, предложенный в 1977 г. Максамом и Гилбер­том, основан на селективной химической модифика­ции различных типов гетероциклических оснований в составе ДНК с последующим

    расщеплением межнуклеотидных связей в модифицированных звеньях. Реакции селективной модификации по каждому типу гетероциклических оснований проводятся таким обра­зом, чтобы в каждой

    молекуле ДНК в среднем моди­фицировалось только одно звено данного типа. По­скольку все звенья данного типа в составе молекулы эквивалентны и реагируют с модифицирующим агентом с

    одинаковыми скоростями, то в сумме каждое звено этого типа окажется частично модифициро­ванным. Дальнейшая обработка ДНК вторичным амином или щелочью приводит к отщеплению

    моди­фицированных гетероциклических оснований от цепи ДНК и разрыву полинуклеотидной цепи в местах от­щепления гетероциклов (рис. 1).

    Модификации подвергают ДНК,

    32Р-меченные по 5'-концевому нуклеотидному звену. Радиоактивная метка

    вводится фосфорилированием с помощью

    32Р-АТР и Т4-полинуклеотидкиназы. Таким образом, в результате химичес­кой деградации получается набор фрагментов ДНК различной длины. Длины этих фрагментов соответст­вуют

    положению мономерных звеньев того типа, ко­торый подвергался модификации. Концевая радиоак­тивная метка служит точкой отсчета при определении длины продуктов химической деградации ДНК

    (рис. 2)

    Набор полученных фрагментов фракционируется электрофорезом в ПААГ, который позволяет разде­лять олиго (поли) нуклеотиды, отличающиеся по длине всего на одно мономерное звено.

    Последовательность нуклеотидов в ДНК читается непосредственно с ра­диоавтографа геля.

    Метод Максама и Гилберта, разработанный для анализа первичной структуры достаточно длинных ДНК, применим и для коротких (8 – 16 звенных) оли-годезоксирибонуклеотидов. Однако в этом

    случае ре­акции химической модификации проводят в более жестких условиях (увеличивая время и температуру реакции) с целью повышения степени модификации.

    Рисунок

    SEQ Рисунок \* ARABIC

    Рисунок

    SEQ Рисунок \* ARABIC

    Н...

    Забрать файл

    Похожие материалы:


    Добавить комментарий
    Старайтесь излагать свои мысли грамотно и лаконично

    Введите код:
    Включите эту картинку для отображения кода безопасности
    обновить, если не виден код



ПИШЕМ УНИКАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
Заказывайте напрямую у исполнителя!


© 2006-2016 Все права защищены